METODA DE IDENTIFICARE SI DETERMINARE CANTITATIVA PENTRU ALCOOLUL BENZILIC IN PRODUSELE COSMETIC

METODA DE IDENTIFICARE SI DETERMINARE CANTITATIVA PENTRU ALCOOLUL BENZILIC IN PRODUSELE COSMETIC

A. IDENTIFICARE

1.SCOP SI DOMENIU DE APLICARE

Aceasta metoda reglementeaza identificarea alcoolului benzilic in produsele cosmetice.

2.PRINCIPIU

Alcoolul benzilic este identificat prin intermediul cromatografiei in strat subtire pe placi cu silicagel.

3.REACTIVI

Toti reactivii trebuie sa fie de puritate analitica.

3.1. Alcool benzilic

3.2. Cloroform

3.3. Etanol absolut

3.4. n-Pentan

3.5. Solvent de developare: dietileter

3.6. Solutie standard de alcool benzilic: se cantaresc 0,1g alcool benzilic (3.1) intr-un balon cotat de 100ml, se aduce la semn cu etanol (3.3) si se omogenizeaza.

3.7. Placi pentru cromatografie in strat subtire, din sticla, 100 x 200 mm sau 200 x 100mm, acoperite cu un start de silicagel 60 F₂₅₄ de 0,25 mm

3.8.Agent de vizualizare: acid 12-molibdofosforic, 10% (m/v) in etanol (3.3).

4. APARATURA

4.1. Echipament uzual de laborator

4.2. Tanc de cromatografiere, camera cu dublu compartiment, dimensiuni de gabarit de cca. 80 mm x 230 x 240mm.

4.3.Hartie pentru cromatografiere: Whatman sau echivalent.

4.4.Lampa de ultraviolet, lungime de unda 254 nm.

5.PROCEDEU

5.1.Preparare proba

Se cantareste 1g de produs de analizat intr-un balon cotat de 100 ml. Se adauga 3ml cloroform (3.2) si se agita puternic pana produsul s-a dispersat. Se aduce la semn cu etanol (3.3) si se agita puternic pentru a produce o solutie clara sau aproape clara.

5.2.Cromatografie in strat subtire

5.2.1. Se satureaza tancul de cromatografiere (4.2) cu n-pentan (3.4) astfel: se captuseste cu hartie pentru cromatografie (4.3) peretele camerei adiacent compartimentului din spate, asigurandu-se ca marginea inferioara a hartiei sa fie in compartiment. se transfera 25ml n-pentan (3.4) in compartimentul din spate prin turnarea acestui solvent peste suprafata expusa a hartiei pentru cromatografie care captuseste tancul. Se repune imediat capacul si se lasa vasul sa stea timp de 15 minute.

5.2.2.Se pun 10 l de solutie proba (5.1) si 10 l solutie standard de alcool benzilic (3.6) in puncte adecvate pe linia de start a placii pentru cromatografie in strat subtire (3.7). Se lasa sa se usuce.

5.2.3 Se pun cu pipeta 10ml dietileter (3.5) in compartimentul din fata al tancului si imediat dupa aceea se pune placa (5.2.2) in acelasi compartiment. Se repune repede capacul tancului, si se developeaza placa pe o distanta de 150 mm. Se scoate placa din tancul de cromatografiere si se lasa sa se usuce la temperatura camerei.

5.2.4. Se observa placa (5.2.3) in lumina ultravioleta si se marcheaza pozitia spoturilor violete. Se pulverizeaza placa cu agent de vizualizare (3.8) si apoi se incalzeste placa la 120C timp de 15 minute. Alcoolul benzilic apare ca un spot albastru inchis.

5.2.5. Se calculeaza valoarea Rf obtinuta pentru solutia standard de alcool benzilic. Un spot albastru cu aceeasi valoare Rf obtinut din solutia proba indica prezenta alcoolului benzilic.

Limita de detectie: 0,1mg alcool benzilic.

B. DETERMINARE

1.SCOP SI DOMENIU DE APLICARE.

Aceasta metoda reglementeaza determinarea cantitativa a alcoolului benzilic in produsele cosmetice.

2.DEFINITIE

Cantitatea de alcool benzilic determinata prin aceasta metoda este exprimat in procente masice (% m/m).

3.PRINCIPIU

Proba este extrasa cu metanol si cantitatea de alcool benzilic din extract este determinata prin cromatografie de lichid de inalta performanta (HPLC).

4.REACTIVI

Toti reactivii trebuie sa fie de puritate analitica si sa fie adecvati pentru HPLC.

4.1. Metanol

4.2.4 Etoxifenol

4.3. Alcool benzilic

4.4. Faza mobila: metanol (4.1)/ apa (45 : 55; v/v).

4.5. Solutie stoc alcool benzilic: se cantareste cu precizie circa 0,1g alcool benzilic (4.3) intr-un balon cotat de 100ml. Se aduce la semn cu metanol (4.1) si se omogenizeaza.

4.6.Solutie stoc standard intern: se cantaresc cu precizie circa 0,1g de 4-etoxifenol (4.2) intr-un balon cotat de 100ml. Se aduce la semn cu metanol (4.1) si se omogenizeaza.

4.7.Solutii standard: intr-o serie de baloane cotate de 25ml se se pun cu pipeta cantitati de solutie stoc alcool benzilic (4.5) si solutie stoc standard intern (4.6) conform tabelului de mai jos. Se aduce la semn cu metanol (4.1) si se omogenizeaza.

APARATURA

Echipament uzual de laborator

Echipament pentru cromatografie de inalta performanta cu detector UV cu lungime de unda variabila si bucla de injectie 10 l.

Coloana analitica: coloana de otel inoxidabil 250 mm x 4,6 mm umpluta cu Spherisorb ODS 5 m, sau echivalent.

Baie de apa

Baie ultrasonica

Centrifuga

Eprubete pentru centrifuga, capacitate 15 ml

PROCEDEU

Preparare proba

Se cantareste cu precizie circa 0,1 g ('m' grame) de proba intr-o eprubeta pentru centrifuga (5.7) si se adauga 5ml de metanol 84.1).

Se incalzeste timp de 10 minute intr-o baie de apa (5.4) mentinuta la 50C, apoi se pune eprubeta intr-o baie ultrasonica pana cand proba este complet dispersata.

Se raceste, apoi se centrifugheaza la 3500 rot/min, timp de cinci minute.

Se transfera lichidul supernatant intr-un balon cotat de 25 ml.

Se re-extrage proba cu inca 5ml metanol (4.1). Se combina extractele intr-un balon cotat de 25ml.

Se pun cu pipeta 2,0ml solutie stoc standard intern (4.6) intr-un balon cotat de 25ml. Se aduce la semn cu metanol (4.1) si se amesteca. Aceasta solutie este folosita la etapa de determinare a analizei descrise la 6.4.

Cromatografiere

Se monteaza echipamentul pentru cromatografie de lichid de inalta performanta (5.2) in modul uzual. Se regleaza debitul fazei mobile (4.4) la 2,0 ml per minut.

Se seteaza lungimea de unda a detectorului UV la 210 nm.

Etalonare

Se injecteaza 10 l din fiecare solutie standard alcool benzilic (4.7) si se masoara suprafetele picurilor pentru alcool benzilic si respectiv 4-etoxifenol.

pentru fiecare solutie standard alcool benzilic (4.7) se calculeaza raportul suprafatelor picurilor alcoolului benzilic fata de 4-etoxifenol. Se traseaza curba de etalonare folosind aceste rapoarte pe ordonata si concentratiile corespondente de alcool benzilic in mg per mililitru pe abscisa.

Determinare

Se injecteaza 10 l solutie proba (6.1.6) si se masoara suprafetele picurilor alcoolului benzilic si respectiv 4-etoxifenolului. se calculeaza raportul suprafatelor picurilor alcoolului benzilic fata de 4-etoxifenol. Se repeta acest proces cu portiuni ulterioare de 10 l solutie proba pana se obtin valori suficiente.

de pe curba de etalonare (6.3.2) se citeste concentratia de alcool benzilic corespunzatoare raportului suprafatelor picurilor alcoolului benzilic fata de 4-etoxifenol.

CALCUL

Se calculeaza continutul de alcool benzilic in proba, ca procent masic, folosind formula:

m = masa in grame a probei luata in analiza (6.1.1)

c = concentratia de alcool benzilic in solutia proba (6.1.6), in micrograme per mililitru, obtinuta de pe curba de etalonare.

REPETABILITATE (ISO 5725)

Pentru un continut de alcool benzilic de 1% (m/m), diferenta dintre rezultatele a doua determinari efectuate in paralel pe aceeasi proba, nu trebuie sa depaseasca 0,1%.