RECOMBINAT IMMUNOBINDING ASSAY (RIBA)

RECOMBINAT IMMUNOBINDING ASSAY (RIBA)

Principiu: tehnica este asemanatoare cu WB, dar Ag fixate pe banda de nitroceluloza sunt obtinute prin recombinare, sunt plasate la distanta egala unele de altele si nu in functie de mobilitatea in campul electroforetic.

Indicatii: confirmarea serurilor reactive (pozitive) in ELISA, cu precizarea specificitatii Ac fata de Ag imobilizate pe banda.

Proba: serul sanguin,

Necesar: truse comerciale (benzi cu antigene imobilizate, reactivi),

Procedura: respecta indicatiile producatorului,

Citire si interpretare:

producatorul indica numele si pozitia fiecarui Ag fixat pe banda,

pe fiecare banda sunt inclusi doi martori pozitivi (M+): unul "slab" si celalalt "intens pozitiv". O banda separata foloseste ca martor negative (M-),

se examineaza intensitatea spoturilor pentru M(+) si M(-); rezultatele sunt validate cand:

intensitatea spoturilor M(+) este cel putin 2+ pe scara de la 1+ la 4+,

spoturile M(-) trebuie sa aiba o intensitate mai slaba decat ale martorului slab pozitiv,

determinarea raspunsului fata de fiecare Ag o facem comparand intensitatea spoturilor cu cea a martorilor slab si intens pozitiv.