DECELAREA LARVELOR DE TRICHINELLA SPIRALIS PRIN EXAMENUL TRICHINELOSCOPIC DIRECT

DECELAREA LARVELOR DE TRICHINELLA SPIRALIS PRIN EXAMENUL TRICHINELOSCOPIC DIRECT

Prezenta metoda se refera la examenul de decelare a larvelor de Trichinella spiralis prin examen trichineloscopic direct din carnea proaspata de porcine, vanat si cabalina. Carnea proaspata este reprezentata de musculature scheletica provenita de la speciile enumerate mai sus, care nu au fost supuse unui tratament de conservare, cu exceptia frigului (refrigerare, congelare).

Pentru a fi admisa pentru prelucrarea in vederea consumului public sau pentru consumul public ca atare, carnea proaspata si produsele din carne proaspata trebuie sa fie supuse unui examen efectuat sub controlul si responsabilitatea unui medic veterinar oficial.

Conditiile necesare pentru organizarea si autorizarea unui laborator ce efectueaza examen trichineloscopic sunt:

un spatiu suficient de mare, inchis cu cheie, obscur, care sa poata permite utilizarea trichineloscopului cu ecran prevazut cu lumina naturala sau artificiala, care sa nu modifice culorile;

trichineloscop cu ecran interior cu putere de marire de 50 ori marire normala de lucru si de pana la 100 ori marire pentru identificarea anumitor formatiuni neclare, aparute la marirea de 50 ori;

compresoare constituite din 2 placute din sticla care se pot presa una peste alta,lama inferioara fiind divizata in 28 de campuri egale;

cutite, foarfeci mici curbe,recipiente pentru probe, pipete; solutie de acid acetic 10% si hidroxid de potasiu sau de sodium 3%fo!osite pentru clarificare.

Examenul trichineloscopic direct cuprinde trei faze operatorii importante : recoitarea probelor, pregatirea campurilor-etalarea, examinarea propriu-zisa.

Recoltarea probelor in vederea examinarii trichineloscopice directe, se efectueaza din locurile de electie a larvelor de Trichinella spiralis in muschii scheletici.

Locurile de electie a larvelor de Trichinella spiralis in musculature striata scheletica, este reprezentata cu precadere in apropierea insertiei muschiului pe os sau la nivelul la care fibra musculara se continua cu tendonul sau aponevroza, locuri ce constituie o bariera naturala ce pune capat migratiei. Astfel locurile de electie sunt urmatoarele:

pentru porcine - musculatura limbii, pilierii diafragmei, portiunea costala a diafragmei, muschii intercostali, muschii maseteri, muschii laringieni, muschii profunzi ai cefei, muschii abdominali superiori;

pentru mistret si urs - localizarile larvelor sunt relative uniforme in diferiti muschi striate, predominind in locurile clasice de electie ;

pentru cabaline - musculature limbii, muschii maseteri, diafragma si muschii gatului.

Pentru fiecare proba de carne de vanat, recoltata in vederea examenului trichineloscopic, se efectueaza cate un compressor a 28 sectiuni.

Probele dupa recoltare, sosesc in laborator unde sunt pregatite in vederea examinarii. Se pregateste copresorul in vederea etalarii desfacand cele doua placi si se aseaza in prim plan placa inferioara iar in plan second placa superioara, garniturile si piulitele. Se noteaza pe portiunea rodata numerele probelor. Cu forfecuta se recolteaza fragmente mici de carne de marimea unui bob de ovaz, pe cat posibil din apropierea insertiei tendinoase si intotdeauna sectiunile s4e efectueaza in lungul fibrelor musculare.Aceste fragmente de came sunt depuse in mijlocul campurilor.Dupa ce au fost completate toate campurile compresorului, se aseaza placa superioara a compresorului, se apasa uniform cu podurile palmelor, iar cu degetele se imprima placii superioare o mica alunecare in asa fel ca sectiunile sa fie bine strivite. Se asaza apoi garniturile si se insurubeaza piulitele.

Cand sectiunile sunt bine executate si bine presate, ele ocupa pana la 3A din suprafata campului.

Daca proba de examinat este uscata si veche, inainte de a fi presata trebuie tinuta timp de 10 - 20 minute in solutie de hidroxid de potasiu, diluata cu doua parti de apa.

Examenul trichineloscopic trebuie efectuat astfel incat fiecare preparat sa fie examinat incet si cu atentie.

Daca in cursul examenului trichineloscopic se deceleaza formatiuni suspecte a caror natura nu poate fi determinate cu certitudine chiar si cu ajutorul unui trichineloscop cu grosisment mai puternic, va trebui sa se procedeze la un examen de control cu ajutorul microscopului.

Examenul microscopic se va efectua in asa fel incat fiecare preparat sa fie examinat incet si cu atentie, cu un grosisment de 30-40 de ori.

In caz de dubii, examenul trebuie repetat pe alte probe si preparate, daca este necesar cu un grosisment superior, pana la obtinerea rezultatului precis. Examenul trichineloscopic trebuie sa dureze cel putin 3 minute pentru o proba.

In cazul utilizarii probelor recoltate din partea musculara a diafragmei, din musculature limbii di mischii maseteri sau din muschii abdominali, examenul trichineloscopic trebuie sa dureze cel putin 6 minute.Timpul fixat pentru examinare nu cuprinde timpul necesar pentru recoltarea probelor si pentru pregatirea preparatelor.

In timpul examinarii se pot identifica larve de Trichinella spiralis in diferite stadii de evolutie precum si alti paraziti sau formatiuni asemanatoare trichinelelor. Astfel apar:

larve in stadiul de intindere si curbare, acestea apar vizibile in campul optic dupa 15-18 zile de la infestarea animalului,

larve in stadiul de spiralare, unele larve prezentand numai in inceput de spiralare. In acest stadium larvele sunt dezvoltate aproape complet. Cuticula larvelor este transparenta, bine conturata, structura interna a parazitului este bine marcata, realizand astfel un contrast decelabil fata de fibrele musculare.In stadiul de spsiralare larvele sunt sigur infestante.Cu atat mai mult, depistarea lor necesita o examinare atenta a intregului compresor, urmarind si zonele periferice ale fiecarui segment de carne,

larve in stadiul de inchistare - cand sunt complet dezvoltate, masoara in jur dejjmm in lungime si 40 microni in grosime.Larvele sunt adapostite in interiorul unor capsule, alcatuind impreuna chisturi ovale cu aspect de lamiae, de suveica si avand uneori extremitatile efilate.

Dupa intrebuintare compresoarele se desfac, se spala cu apa calda, se dezinfecteaza cu solutie 2 % de cloramina, se clatesc masiv cu apa, se zvanta si se sterg cu bucati de panza absorbanta, avand grija san u se zgarie sis a nu aiba scame.

 

Etalarea probelor de examinat pe lamele de compresor

 

Infestatie masiva cu larve de Trichinella spiralis  evidentiate in musculatura striata la porcine

Larve in stadiul de inchistare - chist cu 3 larve de Trichinella spiralis

Chisturi ovale de Trichinella spiralis cu aspect de lamaie, de suveica cu extremitatile efilate

Stadiu de inchistare

Chisturi de Trichinella spiralis sub forma de lamaie cu extremitatile efilate

Evidentierea chisturilor de Trichinella spiralis in lungul fibrei musculare striate

Chist de Trichinella spiralis cu 2 larve la interior

Infestatie masiva cu Trichinella spiralis la nivelul musculaturii striate

Infestatie masiva cu Trichinella spiralis la nivelul musculaturii striate